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細(xì)胞凋亡檢測(cè):多法探秘生命“謝幕”

更新時(shí)間:2025-06-22點(diǎn)擊次數(shù):17
  在生命科學(xué)的微觀世界里,細(xì)胞凋亡檢測(cè)對(duì)剖析疾病機(jī)理、研發(fā)藥物至關(guān)重要。諸多檢測(cè)方法各展其長(zhǎng),共同揭開(kāi)凋亡神秘面紗。
  形態(tài)學(xué)觀察是基礎(chǔ)“視窗”。光學(xué)顯微鏡下,經(jīng)特定染色(如吉姆薩染色),凋亡細(xì)胞體積縮小、核質(zhì)濃縮,與周?chē)<?xì)胞形成鮮明對(duì)比;熒光顯微鏡利用霍echst等染料,讓凋亡細(xì)胞核亮起藍(lán)白熒光,呈致密塊狀或碎片狀,直觀呈現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)異變,為初步判斷提供依據(jù)。電子顯微鏡則更進(jìn)一步,超高倍放大下,清晰可見(jiàn)凋亡細(xì)胞膜出芽、氣泡狀結(jié)構(gòu),線粒體腫脹皺縮,從細(xì)微處洞察凋亡特征。
  生化檢測(cè)聚焦關(guān)鍵“分子信標(biāo)”。DNA瓊脂糖凝膠電泳是經(jīng)典手段,凋亡細(xì)胞內(nèi)核酸內(nèi)切酶激活,切割DNA形成180-200bp整數(shù)倍寡核苷酸片段,電泳后呈梯狀條帶,如同分子梯田,確鑿指示凋亡發(fā)生。TUNEL法借助末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶,標(biāo)記凋亡細(xì)胞斷裂DNA的3'-OH末端,顯色或熒光示蹤,高靈敏揪出凋亡“痕跡”,哪怕早期凋亡也無(wú)所遁形。
 

細(xì)胞凋亡檢測(cè)

 

  流式細(xì)胞術(shù)堪稱(chēng)“高效安檢儀”。用AnnexinV-FITC/PI雙染試劑,AnnexinV可特異性結(jié)合凋亡細(xì)胞外翻的磷脂酰絲氨酸,F(xiàn)ITC熒光標(biāo)記使其在流式圖中顯綠色,PI則進(jìn)入壞死細(xì)胞染色質(zhì)紅,依據(jù)雙色信號(hào),精準(zhǔn)區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡、晚期凋亡與壞死細(xì)胞,快速定量分析,每小時(shí)能處理數(shù)千個(gè)細(xì)胞,為大規(guī)模樣本研究“提速”。
  此外,Caspase活性檢測(cè)直擊凋亡“執(zhí)行蛋白”。通過(guò)比色法、熒光法測(cè)定Caspase家族成員活性,因凋亡時(shí)這些關(guān)鍵酶被激活,催化底物顯色或發(fā)熒光,反映凋亡進(jìn)程程度。
  從形態(tài)甄別到分子追蹤、蛋白活性洞察,細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法多元互補(bǔ),科研者“多管齊下”,方能精準(zhǔn)洞悉細(xì)胞凋亡奧秘,推動(dòng)生命科學(xué)邁向新程。
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